腺病毒的分离纯化——实现基因治疗自由

发布:2023-12-10  更新:2023-12-16

基因治疗指的是通过操纵遗传物质的表达治疗疾病的新兴治疗方式,主要作用机制有基因导入、基因置换、基因抑制等,其针对的临床适应症有遗传病、罕见病和癌症等。随着生命科学技术的进步及临床研究的深入,基因治疗有望治愈一些常规疗法不能治愈的疾病,已成为新药研发的下一个风口。
基因治疗的流程因体内途径和体外途径而有所不同。但两种方式在构建质粒载体后,均需将病毒包装后回输患者体内,将携带正常基因的重组细胞回输到病人体内,实现疾病的治疗。
腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是RG1(最安全级别)的基因治疗载体,无任何潜在致病性,具有安全性好、特异性强、递送效率高、长期有效等特点,是基因治疗领域最常使用的病毒载体之一。目前,无论哪种方式生产出的重组腺相关病毒,得到的重组腺相关病毒颗粒都需要进一步纯化。

腺相关病毒的纯化

目前,高纯病毒分离的首选方法是密度梯度离心法——区分完整病毒与空壳病毒。常见主流介质有两种:氯化铯和碘克沙醇。其中,氯化铯分离纯化后的病毒,在感染细胞前必须去除分离介质。

Sigma默克公司病毒密度梯度分离介质Optiprep™,主要成分是60% (w/v) 碘克沙醇水溶液,货号:D1556

德国Serumwerk Bernburg公司密度梯度分离介质Optiprep™,主要成分是60% (w/v) 碘克沙醇水溶液,货号:1893。(2016年以前为挪威Axis-Shield公司所有,2016-2021.06为挪威Alere Technologies公司所有,货号:1114542,也有写作AS1114542)(Sigma默克公司的Optiprep™,在Sigma网站对应产品页面靠下的部分可以看到“法律信息 OptiPrep is a trademark of Serumwerk Bernburg AG”)。

Optiprep™优势与特点

1. 能保持病毒的高活性,并在一定程度上抑制载体颗粒物的聚集。

2. 无菌性试剂,对人体无毒性。

3. 适用于多种病毒分离,如从支气管肺泡灌洗液中进行无包膜病毒颗粒的分离和各种大分子和脂蛋白的分离。

可分离纯化的病毒种类

摘自:https://mp.weixin.qq.com/s/ZHk2Dd0pnmGp3Vn_F0KLVA