外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell, PBMC）是外周血中的单个核细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。PBMC通常会被大家作为一种样本类型，进行很多不同的实验，如流式染色分析，磁珠分选以及细胞培养实验等。常见的分PBMC的分离液有人，小鼠，兔等淋巴细胞分离液，如果大家想要分一些哺乳动物外周血PBMC，如山羊，骆驼，犬等，我们也是有一款分离液可以分离哦。
货号 | 产品名称 | 规格 | 货期 |
|---|---|---|---|
CL5110 | 5x30ml | 2-3周 | |
CL5115 | 100ml | 2-3周 | |
CL5120 | 500ml | 2-3周 |
操作步骤：
1、将血液收集在含有抗凝剂的试管中。
Note: 如果在Alsever采集血液，使用 1:1 的比例。1400g 离心10分钟。吸出上清液并丢弃。将沉淀重悬在2倍原始血量的PBS重悬。继续执行步骤3。
2、用同体积的PBS稀释血液（1：1）
3、根据Method A 或Method B，将4mL稀释的血液铺在3mL的Lympholyte®-Mammal 上（见图）。（使用10-15ml 离心管）
Method A：在离心管中加入3ml Lympholyte®-Mammal。使用移液器小心地将4 mL稀释的血液铺在Lympholyte®-Mammal上，在界面处尽可能少的混合（图A）。由于 Lympholyte®-Mammal 的密度比细胞悬液大，因此会形成明显的界面（图C）。
Method B：向离心管中加入4ml 稀释的血液。将一个移液器放在试管底部（图 B）。慢慢地将 Lympholyte®-Mammal添加到吸管中，让重力使其在稀释的血液下分层。继续操作，直到3mL的 Lympholyte®-Mammal铺在稀释的血液下。由于 Lympholyte®-Mammal 的密度大于细胞悬液，因此细胞悬液将在 Lympholyte®-Mammal 上方形成明显的界面（图 C）。
4、室温800g离心20min
5、离心后，界面处会有清晰的淋巴细胞层（图D）。用吸管小心地从离心管中取出细胞并转移到新的离心管中。
6、用培养基或者PBS稀释转移的细胞以降低溶液的密度。以800g离心10分钟以沉淀淋巴细胞，然后弃去上清液。
Note：如果需要，在这一步我们可以去除血小板。
A. 加入 0.5mL缓冲液和 50uL凝血酶，然后轻轻重悬沉淀。
B. 用缓冲液补足10mL并充分混合。
C. 非常缓慢地（100 g）离心细胞3分钟；血小板会聚集并沉降到底部。
D. 抽出上清液（包含细胞）并放入另一个试管中，留下聚集的血小板。
Note：
1、对于缓冲液，您可以使用 PBS，或您在整个Lympholyte Mammal操作中一直使用的任何无血清培养基。
2、凝血酶激活血小板导致结块并在低速离心时易于去除。
或者，
A. 将细胞 (800g) 离心1分钟以沉淀细胞。
B. 倒出上清液并将所得细胞重悬于缓冲液中。
C. 再重复2次。这个时候会观察到，每次这样做时，随着血小板被去除，产生的上清液会变得更加清澈。
7、洗淋巴细胞2-3次
这样就可以得到我们想要的PBMC啦！
译自：厂家说明书
转自：https://mp.weixin.qq.com/s/K27KU5-xXrkmI7_qRo-Yow
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