人  单个核细胞  组织浸出液  

人组织浸出液单个核细胞分离液KIT

品牌：天津灏洋/TBD点击下载说明书

储存：常温保存，有效期2年。启封后置常温保存

【产品货号】

LDS1075HLSK

【适用范围】 适用于人组织滑膜液、灌洗液，胸、腹及宫腔积液中单个核细胞的分离。

【产品规格】

200ml/Kit

【产品组成】 为方便广大用户使用，试剂内容如下：

【实验前准备】

1.   适用仪器

最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机

2.   无菌硅化离心管

【单细胞悬液的制备】

1.   取组织浸出液（积液）于适当离心管中，350-400g，离心 5-10min。

2.   弃上清，用样本稀释液（产品编号：2010C1119）重悬细胞浓度为 2×108–1×109/ml 的单 细胞悬液备用（根据浸出液样本量调整样本稀释液的用量以保证单细胞悬液的浓度）。

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。

1.   取一支适当离心管，加入与单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。

2.   用吸管小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min。（注：根据 单细胞悬液量确定离心条件，单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

3.   离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色单个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞和死细胞等。

4.   用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一 15ml 离心管中，向离心管中加 入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。 注：若细胞悬液浓度过低，白色环状细胞层不明显，则吸取全部分离液层。

5.   250g，离心 10min。

6.   弃上清。

7.   用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

8.   250g，离心 10min。

9.   重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

分离图例

【注意事项】

1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最 好在取样 2h 内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后 分离效果更差甚至不能达到分离目的。

2. 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。

3.  吸取过多的单个核细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的 粒细胞数量增加。

4.  分离液用量大于单细胞悬液样本时，分离效果更佳。

5.  如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助。

【储存条件及有效期】

常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启 封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

【参考值（参考范围）】 本实验单个核细胞提取率及纯度大于 80%。

【可能存在的问题及解决方法】

1.   由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

2.   本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离 心时间，对离心转速进行调整。

3.   本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可 能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。

注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果， 离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。