【包装规格】

200ml/Kit

【产品组成】 为方便广大用户使用，试剂内容如下：

【实验前准备】

1. 适用仪器

最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机。

（离心机使用时调整为慢升慢降（具体参数请咨询离心机厂家）建议升速（指开始启动→达 到设定离心力）的时间、降速（指设定离心时间完成→机器完全停止）时间均控制在 3 分钟 左右。）

2. 抗凝剂的选择 在动物实验采血时，很多实验者选择医用真空采血管获得抗凝血，医用采血管中的抗凝剂只考虑血浆质量，但不利于高纯度细胞分离实验（或必须使用枸橼酸钠的医用真空抗凝采 血管）

为此，天津灏洋特别开发出专用实验动物抗凝剂及抗凝管专用于细胞分离，改变使用普通采血管获得抗凝血分离效果不佳，提取率及纯度低下的不良结果。

3. 细胞最佳分离时间

血液离体后 2 小时内。如达不到 2 小时内分血条件，请务必于 4 小时内进行分血步骤，超过 4 小时很难顺利进行分离。

4. 分离液的使用环境

a. 分离液需常温（37℃-15℃）避光保存，严禁冷藏冷冻保存；

b. 使用时严格遵守无菌操作规范，并在 18℃-22℃环境温度下进行操作，20℃条件下分离 效果最佳。超出此温度范围，有可能使分离液密度发生改变，造成分离效果不佳。

5. 无菌硅化离心管

6. 参考值（目的细胞参考范围）

本试剂盒可保证目的细胞的提取率大于80%，不是纯度。如需获得高纯度目的细胞， 请配合免疫磁珠分选。本试剂盒可减少磁珠的使用量，减少成本。

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃（试剂需要复温。夏季 20℃， 冬季 25℃。）的条件下进行。
血液样本需要稀释时，实验方法如下：

稀释方法：1 份的 PBS 或样本稀释液(产品编号：2010C1119)加 2 份的血液进行稀释（PBS:抗凝血＝1:2）； 注：稀释液要求：用不含钙镁离子的缓冲液或培养基进行血液稀释。

各种规格离心管的使用方法（推荐最佳方法）
取一支无菌离心管，加入分离液，后缓慢加入血液样本或新鲜抗凝血。血液样本或 新鲜抗凝血小心加于分离液液界面之上。（若采血量较少，需小量分离，分离液的量不 得少于 3ml，抗凝血量在 0.2-3ml 之间）

1.10ml 无菌硅化离心管：
A. 最佳比例：4ml 分离液+ 0.2-3ml 血液样本；

B. 最佳离心条件：20℃环境下，400g 离心 30min。

2.15ml 无菌离心管：
A. 最佳比例：5ml 分离液+ 4ml 血液样本；

B. 最佳离心条件：20℃环境下，500g 离心 30min。

3.50ml 无菌离心管：

A. 最佳比例：20ml 分离液+ 20ml 血液样本；

B. 最佳离心条件：20℃环境下，650g 离心 30min。

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实验后续方案

1. 离心后，离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

2. 小心吸取血浆层、淋巴细胞层和分离液层，弃去。

3. 在剩余红细胞的离心管中，加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

4. 250g，离心 10min。弃去上清。

5. 用吸管吸取 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

6. 250g，离心 10min，弃去上清。

重复清洗两次，弃去上清，用  0.5ml  清洗液（产品编号：2010X1118）或根据下一步实验要 求加入相对应液体，重悬所得细胞。

分离图例

【注意事项】

1. 本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心 管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会 变成毛面，影响细胞分离效果。

2. 如第一二三层吸取不干净，会导致粒细胞等混杂。

3. 不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。稀释液要求：不含钙镁离子的缓冲液或培养基。 血液样本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。

4. 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持。

【储存条件及有效期】

常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

【参考值（参考范围）】 本实验红细胞提取率大于 80%。

下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

【可能存在的问题及解决方法】

1. 离心机离心力、转速、半径的换算方法