多形核粒细胞的密度梯度分离(方法一)

发布:2022-04-23  更新:2024-03-16

       多形核粒细胞(polymorphonuclear leukocytes,PMNs)又称多叶核白细胞,粒细胞(granulocytes)、多形核白细胞、多型核细胞,是外周血中一种特殊的白细胞家族,包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。其中中性粒细胞来源于骨髓,具有分叶形或杆状的核,占数量的绝大多数。血液多形核粒细胞常通过密度梯度离心的方式来纯化得到。

       利用多形核粒细胞(PMNs)和单个核白细胞(PBMCs)及红细胞的密度差异,在离心管下部铺密度1.119g/ml的密度梯度介质,上面再铺密度1.077g/ml的密度梯度介质,血液样品铺在最上面,离心后,单个核白细胞停留在血液和1.077g/ml密度梯度介质之间的界面,多形核粒细胞(PMNs)停留在两个密度梯度介质之间的界面,从而达到分离效果。该方法适用更多人群的血液样本,都可以得到好的分离效果。该方案也适用于其他很多动物的血液,只是两层梯度介质的密度要与动物想匹配。

使用该分离方案,主要有如下两类产品:

1、已经配制好的两层密度梯度溶液:Sigma的Histopaque-1119+Histopaque-10771(现货),索莱宝/Solarbio的人外周血中性粒细胞分离液试剂盒(P9040,现货,印度HIMEDIA的GranuloSep™ GSM 1119,德国Pan_Biotech/Pan_Seratech的Pancoll human for granulocytes, density 1.119 g/ml。需要的1.077g/ml单个核白细胞分离液,很多厂家都有,具体见另一文章(常用各品牌人淋巴细胞分离液大全),由于各个厂家的1.077g/ml单个核白细胞分离液还是可能有所差异的,所以选择两个密度的介质时,还是尽量选择同一个厂家的为好。详细操作步骤,见Histopaque-1119说明书

2、利用NycodenzHistodenzPercollOptiprep都有现货)这些通用密度梯度介质自行配制所需的两层密度梯度介质,其中用Optiprep的详细方案见另一文章(用Optiprep分离人和其它灵长类血液多叶核白细胞)。自行配制,稍微麻烦一些。

参考资料:

English, D., and Andersen, B.R., Single-step separation of red blood cells. Granulocytes and mononuclear leukocytes on discontinuous density gradient of ficoll-hypaque. J. Immunol. Methods, 5,249 (1974).