多形核粒细胞的密度梯度分离(方法二)

发布:2022-04-24  更新:2023-10-06

       该方法利用多形核粒细胞(PMNs)和其它细胞的密度差,同时利用密度梯度介质的高渗透压,使红细胞失水,变小,密度变大,从而更易和粒细胞分离、沉降。这一方案来自于参考资料。

       具体来讲,利用密度梯度介质的高渗透压使红细胞失水而缩小,从而增大红细胞的有效浮力密度;分离液中的右旋糖苷/葡聚糖/羟乙基淀粉480能使红细胞聚集并在溶液中快速沉降,随着离心过程红细胞的逐渐沉降和失水,分离液也形成连续梯度,这样只要离心力和离心时间选择合适,即可将多形核粒细胞(PMNs)停留于密度梯度介质中,而红细胞沉降在密度梯度介质底部,并且单个核细胞(PBMCs)仍就停留于密度梯度介质和血液的界面,从而达到同时分离获得多形核粒细胞(PMNs)和单个核细胞的效果。

       市场上利用该方案已经配制好的产品有:Axis-Shield/Alere Technologies AS/Serumwerk Bernburg AG公司的Polymorphprep,加拿大CEDARLANE的Lympholyte-poly,天津灏洋/TBD的TBD1114683(多叶核细胞分离液)和LZS11131(人中性粒细胞分离液试剂盒),以及MP BIOMEDICALS的MONO-POLY RESOLVING MEDIUM/单多核白细胞分离液,使用方法几乎完全一样,详见各产品说明书。

       这类已经配制好的产品,优点是使用方便,操作简单,缺点是有时候分离效果不能令人满意,比如贫血人员的血液。

注意事项:

该类即用型分离液仅适用于人的未作稀释的血液,不适用于动物。

该类即用型分离液分离血液时的温度需要保持在18度-22度之间,因为温度的变化会影响分离液的密度和粘度,从而影响分离效果。

据已用客户反馈,该类产品,对于贫血人员(mild anemia)的血液,分离效果不好,一般需要是健康人员的血液才行。

相关产品:

名称

厂家

Polymorphprep

Serumwerk Bernburg AG

Lympholyte-poly   Cell Separation Media (Isolation of PMNs from Human peripheral blood), liquid

CEDARLANE

多叶核细胞分离液

天津灏洋/TBD

参考资料:

Ferrante, A. and Thong, Y.H. (1980) Optimal conditions for simultaneous purification of mononuclear and polmorphonuclear leucocytes from human blood by the Hypaque-Ficoll method J. Immunol. Meth., 36, 109-117。